Cy7是一种近红外花青素荧光染料。由于它的荧光波长(Em:770nm)恰好处于肌体组织近红外窗口I的区域(肌体的血液,体液和组织此区域背景荧光弱,而长波长穿透性强),所以Cy7常常应用于小动物活体体内成像中。Cy7荧光肉眼不可见,并且显微镜观察时需要近红外滤片,很多荧光显微镜(包括共聚焦显微镜)并不配备,但是流式细胞仪(flow cytometry)常常配备Cy7滤片组。Cy7是常用荧光染料,Cy7可以用来标记核酸,蛋白,抗体,多肽,纳米粒等,它是最常见的小动物显影剂之一。
马来酰亚胺(maleimide)是生物标记反应中常用的基团,它可以和巯基(-SH)通过亲和加成反应生成稳定的巯醚(thioester)结构从而实现标记。尽管胺基(比如赖氨酸精氨酸侧链)也有亲和性,但在中性或微酸性缓冲液中,马来酰亚胺选择性标记巯基(反应速度比胺基快>1000倍)。标记反应反应迅速,选择性高,产率好,另外,巯基是一种在生物分子中广泛存在的官能团,比如蛋白中的半胱氨酸(cysteine)和双硫键等,因此马来酰亚胺/巯基(maleimide/thiol)标记已成为仅次于NHS/胺基标记的最常用生物连接反应。
Cy7-马来酰亚胺的水溶性较低,所以在水相的标记反应体系内需要使用有机共溶剂,常用有机溶剂包括DMF,DMSO和乙腈等。如需标记的分子对有机溶剂敏感,可选择磺化花青素,即磺化Cy7-马来酰亚胺。两者的光谱性质几乎一致,因此大部分应用可相互替换。两者的主要区别在于:磺化染料是水溶性的,在水相的标记反应体系内不需要使用有机共溶剂,并且降低染料在水中聚集的可能性,增强标记效率。
Cy7-马来酰亚胺标记后的产物Ex/Em是740/770nm。和它具有相似荧光特性的染料包括Alexa Fluor 750,DyLight 755等。
CAS号 | 2120392-49-4(类似) |
分子式 | C40H47ClN4O3 |
分子量 | 667.28 |
结构式 | |
光谱特性 | Ex/Em=740/770nm (PBS缓冲液) |
消光系数(ε) | 199000L·mol-1·cm-1 |
量子产率 | 0.3 |
外观 | 绿色固体 |
溶解性 | 易溶于甲醇,DMF等有机溶剂,微溶于水 |
保存条件 | 避光,干燥,-20℃保存 |
光谱特性 | Ex/Em= |
- Cy7-马来酰亚胺水溶性较低,标记反应可在有机溶剂中进行或者含有机助溶剂的水相中进行。
- 天然生物分子中巯基一般于氧化状态(如双硫键)存在,在马来酰亚胺标记前,务必用还原剂(如DTT,TCEP)活化巯基并除去多余还原剂。
- 马来酰亚胺也可以和叠氮化合物反应,应避免叠氮官能团。
- 标记反应不要放在强光下,因为大部分荧光化合物在强光下长时间照射会缓慢光漂泊。
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